產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲存液公司正在出售的產(chǎn)品:鴨胚肝間質(zhì)細胞(永生化) G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y12封閉多肽 滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒 大鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA檢測試劑盒 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)酶活性比色法檢測試劑盒 ?,F青霉 卷曲螺旋結構域蛋白25抗體
更新時(shí)間:2024-01-12
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
貨號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 |
A-Hc2012 | RNAsafe 高效 RNase 滅活劑 | 5ml |
保存條件:-20℃保存半年以上。
產(chǎn)品介紹:
RNAsafe 含有數種特殊化合物,可使 RNase 失活,高效去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的 RNase,從而防止 RNA 的降解。RNAsafe 可用于制備 RNA 懸浮液,并可加入到各種 RNA 的反應液中(如體外轉錄、逆轉錄、RT-PCR、探針制備、分子雜交、Nuclease Protection Assay 等)。滅活可能存在的微量 Rnase 污染,保持 RNA 穩定性,獲得更佳實(shí)驗結果。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 適合于各種緩沖液,包括不能由DEPC處理的Tris及MOPS緩沖液系統等。
2. 安全,方便地去除溶液中微量的RNase。
3. 處理過(guò)的溶液隨時(shí)可以再處理(60℃ 10-20 min),以去除任何可能發(fā)生的后續RNase污染。
4. 不影響逆轉錄酶、RNA聚合酶和耐熱DNA聚合酶的活性,可用于逆轉錄和體外轉錄反應。
5. 處理后不需高壓滅菌。
使用方法:
1. 本品為 20×濃縮液,在待處理的一般溶液或反應緩沖液中稀釋 20×RNAsafe 到終濃度為 1×的工作濃度。如:95μl 待處理溶液中可加 5μl RNAsafe。
2. 60℃處理 20 min 以使 RNase 失活。經(jīng) RNAsafe 處理后的溶液冷卻至室溫即可使用。處理過(guò)的溶液可再次處理(60℃ 10-20 min),以去除存儲過(guò)程中可能發(fā)生的 RNase 污染。溶液冷卻到室溫后再加入逆轉錄酶等對高溫敏感的酶制劑。
PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?
試劑:
模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過(guò)程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥(niǎo)苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實(shí)驗步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產(chǎn)物;
設備:
PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時(shí)不同溫度環(huán)節的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。 這些試劑和設備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進(jìn)行PCR反應并得出準確結果。
PCR相關(guān)基礎實(shí)驗:
PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個(gè)循環(huán)組成,每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟:
一、變性:
利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,通常加熱長(cháng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。
二、退火或稱(chēng)接合,復性:
在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。
三、延伸:
DNA聚合酶由降溫時(shí)結合上的引物開(kāi)始沿著(zhù)DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴(lài)于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴(lài)于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(cháng)度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應條件優(yōu)化:
1、變性溫度和時(shí)間:
保證模板DNA解鏈是保證整個(gè)PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續時(shí)間過(guò)長(cháng),可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復性溫度和時(shí)間:
PCR擴增特異性取決于復性過(guò)程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。
3、延伸溫度和時(shí)間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時(shí)間,可根據待擴增片段的長(cháng)度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長(cháng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,延伸時(shí)間過(guò)長(cháng)可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時(shí)間。
4、循環(huán)數:
其他參數選定后,PCR循環(huán)次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應的產(chǎn)率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數。循環(huán)次數越多,非特異擴增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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腎綜合癥漢坦病毒ⅠⅡ型通用PCR檢測試劑盒 | 補體成分2ELISA試劑盒 | 耐萬(wàn)古腸球菌PCR檢測試劑盒 |
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蓮子探針?lè )?/span>PCR鑒定試劑盒 | 超敏生長(cháng)激素ELISA試劑盒 | 伯克氏菌通用探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒 |
犬腺體病毒1型(犬傳染性肝炎病毒)染料法熒光定量PCR試劑盒 | 叢狀蛋白A3ELISA試劑盒 | 乙型脊髓灰質(zhì)炎病毒PCR檢測試劑盒 |
犬血支原體探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒 | 單純皰疹病毒抗原-1ELISA試劑盒 | 牛痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 |
痢疾桿菌PCR檢測試劑盒 | 蛋白L-異天冬氨酸-O-甲基轉移酶ELISA試劑盒 | 馬立克氏病病毒1型PCR檢測試劑盒價(jià)格 |
立克次氏體通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 蛋白磷酸酶1調節因子亞基18ELISA試劑盒 | 綿羊鞭蟲(chóng)PCR檢測試劑盒供應 |
犬鏈球菌PCR檢測試劑盒 | 動(dòng)力蛋白激活蛋白4ELISA試劑盒 | 耐久腸球菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒 |
柯薩奇病毒 A2 型核酸檢測試劑盒 | 人核心結合因子α1,CBFA1/RUNX2 試劑盒ELISA | 牛副結核分歧桿菌(MPB)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
病毒 H7N9 變異株( HPAI-H7)核酸檢測試劑盒 | 人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒 | 禽腺病毒D型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
豬囊尾蚴染料法熒光定量PCR試劑盒 | RNAsafe 高效 RNase 滅活劑人鈣離子通道抗體(IgG)檢測試劑盒elisa | 黃綠青霉PCR檢測試劑盒 |
肺炎克雷伯菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒 | 人MYC誘導核抗原(MINA)試劑盒ELISA | 犬腺病毒探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒 |
微生物致病菌PCR快速檢測系列 | 人白介素35(IL-35)ELISA檢測試劑盒 | 牛分枝桿菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒 |